smallRNAseq

实验流程如图所示： 

1.Total RNA 样品检测

诺唯赞对 RNA 样品的检测主要包括 3 种方法： 

(1) Nanodrop 对 RNA 进行初步的浓度和纯度检测； 

(2) Qubit 对 RNA 浓度进行精确定量； 

(3) Agilent 2100 精确检测 RNA 的完整性（RIN 值）。 

2.文库构建及质控

样品检测合格后，使用 Small RNA Sample Prep Kit 构建文库，利用 Small RNA 的 3’及 5’端特殊结构 

（5’端有完整的磷酸基团，3’端有羟基），以 total RNA 为起始样品，在 Small RNA 两端加上接头，然后 

反转录合成 cDNA。随后经过 PCR 扩增，PAGE 胶电泳分离目标 DNA 片段，切胶回收得到的即为 cDNA 

文库。 

构建原理如图所示：

3. 上机测序 

文库质控合格后，把不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求 pooling 后进行 Illumina HiSeq 测 

序。

4.生物信息学分析

HiSeq 测序所得 49nt（或者 50nt）序列，通过过滤得到可信的目标序列，对这些序列的质量、长度及 

样品间公共序列进行统计。通过目标序列分类注释，可以获得样品中包含的各组分及表达量信息。对未注 

释的小 RNA 片段来进行新 miRNA 的预测；对已知 miRNA 和新 miRNA 进行差异分析、聚类分析、靶基 

因预测和对靶基因的 GO 功能注释以及 KEGGpathway 注释。 

信息分析流程如图所示：